Как проводится гистологическое исследование: виды, методы, особенности

О том, как проходят гистологические исследования, какие задачи кроме диагностических они позволяют решать, что влияет на сроки их выполнения рассказывает заведующая патологоанатомическим отделением с прозектурой НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова, к.м.н. Анна Сергеевна Артемьева.

Ложные надежды

Одним мазком: тест на COVID-19 правдивее на восьмой день после заражения В это время ниже всего вероятность получить ложноотрицательный результат

ПЦР-метод, используемый для выявления РНК коронавируса, дает высокий процент ложноотрицательных результатов, что делает необходимым поиск альтернативных способов диагностики COVID-19. Поэтому при постановке диагноза следует прежде всего учитывать симптомы и характер поражения легких. Об этом свидетельствуют результаты исследования международной группы ученых, которое прошло под руководством специалистов Сеченовского университета. Соответствующая научная статья опубликована в журнале Clinical Infectious Diseases.

Ученые сравнили течение COVID-19 у двух групп пациентов — с положительным результатом теста и с характерными симптомами, но без лабораторного подтверждения инфекции. Авторы изучили истории болезни 3480 человек, поступивших в больницы Сеченовского университета в апреле и мае. У половины (1728 больных) наличие вируса было подтверждено лабораторным ПЦР, у остальных (1748) не было надежного результата (тест отрицателен или результаты не определены), но специфические признаки и состояние легких указывали на заражение коронавирусом.

Специалистов интересовали демографические и физические характеристики (пол, возраст, рост, вес), наличие у пациентов сопутствующих заболеваний и данные компьютерной томографии (КТ) — в частности, объем поражения легких и характерные для COVID-19 изменения по типу «матового стекла».

Сладкий вирус: глюкометр определит SARS-CoV-2 с точностью в 100% Для проведения быстрого и недорогого анализа на COVID-19 потребуется лишь капля слюны

Чаще всего в больницы с COVID-19 попадали люди среднего и старшего возраста (45–66 лет). Большинство пациентов (76%) находились в состоянии средней степени тяжести. Почти у всех на момент поступления в больницу была высокая температура, у многих слабость и кашель, а КТ показывала значительные изменения тканей легких. Потеря обоняния, боль в горле и мышцах, лихорадка чаще встречались у тех, кто потом выздоровел и выписался, а одышка и спутанность сознания — у пациентов, которые в итоге не смогли справиться с болезнью.

— Важность нашего исследования заключается еще и в том, что из России вышли прозрачные и качественные данные, демонстрирующие, что многие аспекты течения коронавирусной инфекции мало отличаются от того, что видят коллеги в других странах. Статистика в большинстве стран не учитывает людей, у которых COVID-19 не подтвержден лабораторно. Таким образом, можно предположить, что число людей, переболевших или умерших от COVID-19, существенно больше, — рассказал Даниил Мунблит.

Читайте также:  Радиочастотная деструкция грыж межпозвонковых дисков

Таким образом, заключают авторы работы, если альтернативного объяснения характерным симптомам нет, они являются достаточным основанием для постановки диагноза и выбора тактики лечения даже при отсутствии положительного теста ПЦР.

Антитело как улика: колебания гормонов влияют на результаты ПЦР-теста Эндокринные особенности затрудняют диагностику коронавируса у женщин

Наличие положительного теста не оказывает также статистически значимого влияния на течение заболевания и шансы выжить. Вероятность смертельного исхода оказалась выше у пациентов мужского пола и старшего возраста, а также у людей с болезнями почек или сердца, диабетом и деменцией.

Назначение методов

Психологические исследования позволяют выявить некоторые общие черты, свойственные популяции людей.

Назначение методов

Под популяцией понимается совокупность объектов изучения, которых объединяет какой-то общий признак.

Это могут быть представители одной социальной группы, сообщества, возрастной категории, профессиональной области и т.д.

Для проведения исследования производится выборка, которая должна быть репрезентативной (т.е. максимально точно и достоверно отражать характеристику всей совокупности в целом). Полученные в результате работы психолога результаты подлежат обработке.

Назначение методов

Обработка данных — это отдельная область экспериментальной психологии, напрямую связанная с математикой, статистикой.

Любое психологическое исследование состоит из нескольких этапов: разработка программы, проведение процедур, анализ полученных результатов.

Методы математической обработки данных позволяют проверить достоверность начальных гипотез и, соответственно, опровергнуть их или подтвердить. В итоге решаются следующие задачи:

Назначение методов
  • систематизируются полученные сведения;
  • выявляются допущенные ошибки, неточности;
  • обнаруживаются скрытые закономерности, связи;
  • определяется достоверность результатов.

Обработка данных бывает количественной и качественной.

В первом случае изучаются различные параметры объекта исследования, которые подлежат измерению.

Назначение методов

Во втором случае речь идет о проникновении в суть проблемы, выявлении глубинных процессов. Оба уровня тесно связаны между собой, поскольку только единство из применения позволяет получить точные результаты.

При этом качественные данные невозможно измерить, единственный способ их математической оценки — выявление частоты встречаемости (например, как часто встречается среди испытуемых холерический тип темперамента).

Количественные же данные можно анализировать при помощи специальных статистических методов, в основе которых лежат математические параметры.

Назначение методов

Количественная обработка производится при помощи двух групп методов: первичных, вторичных.

Этапы математической обработки данных эмпирического исследования

Итак, все необходимые для анализа сведения уже на руках у исследователя. Чтобы доказать выдвинутую гипотезу не всегда достаточно провести сравнительный анализ суждений с уже доказанными теориями, порой требуется предъявить неопровержимые доказательства. Как же их получить? Ответ прост. Если логика автора может завести его в дебри или быть ошибочной, то цифры никогда не врут. Одним из эффективнейших способов обработки данных является использование математических методов. Он применим фактически к любым научным трудам и типам данных, в том числе эмпирическим.

Читайте также:  Как обследовать кишечник на заболевания: все современные методы

Ключевыми элементами математического анализа эмпирических данных научной работы являются: признак, показатель, переменная и параметр. Все эти 4 категории характеризуют конкретное значение, числовую единицу (величину) того, что было выявлено у объекта исследования.

Пять этапов

Математическая обработка эмпирических данных проходит ряд этапов:

Возникли сложности?

Нужна помощь преподавателя?

Мы всегда рады Вам помочь!

дипломные магистерские диссертации

Этап №1. Первичный анализ переменных.

Здесь исследователю необходимо отсортировать все собранные материалы, определить признаки и критерии, по которым будет разбита информация, и оформить ее в виде таблиц, графиков, диаграмм и пр.

Важно тщательно проверять все занесенные в таблицу или чертежи данные, обеспечить максимальную точность всех действий, чтобы прийти к достоверному результату, исключить ошибки и погрешности.

Этап №2. Определение основных критериев для проведения математического анализа.

Этапы математической обработки данных эмпирического исследования

На этом этапе важно правильно определить искомый фактор, а также от чего он зависит, то есть обозначить ключевой показатель и переменные. Затем следует разработать математическую модель. Обычно анализ начинается с анализа первичных статистик. В этих целях можно использовать следующие действия: среднее арифметическое, квадратное уравнение, дисперсия, разброс, медиана и пр.

Здесь важно определить, как все полученные данные будут фиксироваться и использоваться в дальнейшем. Во время анализа важно учитывать действующие ограничения (нормативы) в отношении каждого показателя, переменной.

Если для проведения исследования и анализа недостаточно данных или они не соответствуют выбранным критериям, то придется изменить метод исследования или же пересмотреть критерии.

Этап №3. Выбор математических и статистических методов обработки данных.

После того, как все сведения были упорядочены и приведены в пригодный для расчетов и иных операций вид, необходимо определить наиболее оптимальный способ их анализа посредством использования приемов математики и статистики. Данный подход позволит сделать выводы автора более аргументированными, обоснованными и точными.

Этап №4. Обработка данных.

Сейчас таким помощником является компьютер и соответствующие программные обеспечения. Использование этих технических средств ускоряет процесс обработки данных, но для этого требуются определенные знания и навыки.

Этап №5. Формирование результатов исследования, выводов.

На основе проведенной математической обработки эмпирических данных, автору необходимо сделать определенные умозаключения. Важно расшифровать, какой параметр и что означает, какие результаты были получены и о чем они свидетельствуют. Такой подход позволит конкретизировать результат научной работы, сделать ее более аргументированной.

Читайте также:  Первичный склерозирующий холангит

Как обрабатывают эти материалы для проведения гистологического исследования?

1 Этап. Фиксация — «консервирование» биоптата в формалине — специальном химическом растворе, который предотвращает гниение, позволяет сохранить структуры ткани.

Фиксация биоптата может занимать от 6 до 24 часов – в зависимости от его вида и размера.

Операционный материал фиксируется дольше, в несколько этапов. Сначала предварительная фиксация, которая занимает примерно 12 часов. Затем вырезка нужных фрагментов и повторная фиксация еще 24 часа.

Как обрабатывают эти материалы для проведения гистологического исследования?

Соотношение объема материала к объему формалина должно быть 1:20.

Время фиксации сократить нельзя!

2 Этап. Процессинг — процесс обезвоживания, обезжиривания и пропитки материала парафином. Автомат перемещает кусочек материала из раствора в раствор.

В качестве растворов применяются: абсолютированный изопропиловый спирт (6-8 смен), ксилол (2 смены), расплавленный парафин (2 смены).

Программа разнится для «жирного» материала (к которым относятся, например, ткани молочной железы) и «нежирного» – 36 и 24 часа соответственно.

Как обрабатывают эти материалы для проведения гистологического исследования?

Процесс получения парафиновых блоков.

3 Этап. Изготовление парафинового блока. Кусок материала помещается в форму с расплавленным парафином (уже другим нежели во время процессинга – с более высокой температурой плавления) и охлаждается. Выполняется вручную, сложно ускорить.

Микротомия

4 Этап. Изготовление срезов. Толщина образца — кусочка ткани, залитого в парафин – 1-3 мм. Толщина каждого среза 4-5 мкм (0,004-0,005 мм). Выполняет лаборант с использованием специального инструмента – микротома.

Срезы монтируются на стекла и должны высохнуть.

Как обрабатывают эти материалы для проведения гистологического исследования?

Несмотря на то, что часть материала теряется при выравнивании в микротоме, при должном профессионализме, из одного образца — материала от одной биопсии, операционного материала от одной опухоли, возможно изготовить около 100 стекол (микропрепаратов).

Для чего делаются срезы?

Срезы делаются для рутинной окраски гематоксилинном и эозином, иммуногистохимического исследования и других видов исследований.

Срезы для всех исследований используются одинаковые, различается окраска, могут отличаться стекла, на которые они монтируются, так для ИГХ и FISH нужны специальные адгезивные стекла или заряженные стекла.

Гистостейнер

Как обрабатывают эти материалы для проведения гистологического исследования?

Блоки и стекла способны храниться долгие годы и использоваться для проведения дополнительных гистологических исследований, пересмотров, а также в научных целях.

Архив

Архив гистологических материалов собирается в НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова с 1927 года и содержит более 10 млн единиц хранения (микропрепараты — стекла, парафиновые блоки, архивные карточки, влажный архив).