Что такое ПЦР анализ и вирусная нагрузка?

Нормальная и завышенная вирусная нагрузка при гепатите С

Вирусной нагрузкой называется количественное измерение патогена в биологических жидкостях зараженного организма. Так как основной концентрат вируса гепатита С содержится в кровяной плазме больного, для подсчета реплик патогенного РНК используется именно кровь. Что касается вирусной нагрузки при гепатите С, норма или критическое значение РНК-реплик определяются при исследовании 1 мл биологического материала.

Для определения патогена ВГС в организме пациента проводятся 2 типа лабораторных исследований, а именно:

• Качественный. По наличию реплик РНК и иммуноглобулинов (антител) определяется сам факт заражения. Итогом подобного исследования на вирусную нагрузку гепатита С является положительный или отрицательный показатель инфицирования ВГС;
• Количественный. Определяется количество РНК-копий и уровень заражения пациента. Подобный анализ помогает выявить стадию текущего недуга.

При этом, если вирусная нагрузка при гепатите С низкая, это не всегда говорит о том, что пациент полностью здоров. После инфицирования могло пройти не так много времени, либо болезнь протекает в латентной форме. Если же вирусная нагрузка при гепатите С высокая, это говорит о заражении ВГС. Чем выше показатели, тем больше организм пациента заражен патогеном.

Исследование проведено при поддержке научно-исследовательского института индийского фармацевтического производителя Zydus Heptiza. Официальный сайт в России

Виды ПЦР на вирусный гепатит В

Существует 2 вида диагностики, которые назначают при гепатите В. Качественный ПЦР дает возможность с точностью в 100% сказать, есть ли ВГВ в крови или нет. Количественный ПЦР показывает активность вируса, то есть сколько ДНК фрагментов ВГВ содержится в 1 мл крови.

Качественный ПЦР и его трактовка

Проведение анализа крови на гепатит В методом ПЦР может выявить лишь наличие ДНК-фрагментов. Назначается в том случае, когда пациент подозревает о заражении ВГВ (HBV) или когда другие способы диагностики, например, серологические пробы не дают четкого ответа. Расшифровка результатов при проведении качественного анализа очень проста:

• отрицательный результат — вируса нет;
• положительный результат — вирус обнаружен.

Целью качественного ПЦР является подтверждение или опровержение наличия вируса гепатита В, а также проведение ранней диагностики. Если ВГВ выявлен в течение 1-2 недели после заражения, то лечение станет максимально эффективным. При активном развитии HBV в течение 2-х месяцев и выше, заболевание переходит в хроническую форму и полному излечению не подлежит.

В случае когда качественный ПЦР на гепатит показывает наличие вируса, следующим этапом становится проведение количественной диагностики.

Количественный ПЦР

Для назначение эффективного лечения или оценки результатов проводимой терапии просто знать, что у больного имеется ВГВ, недостаточно. Необходимо определить количественно значение ДНК вируса гепатита В в 1 мл крови, то есть вирусную нагрузку на организм. Этот вид ПЦР на гепатит В проводится в следующих случаях:

1. Перед назначением лечения.
2. Для оценки эффективности терапии.
3. Для определения развития устойчивости вируса к принимаемым препаратам.
4. Для определения стадии, на которой находится заболевание.

Единицей измерения вируса являются международные единицы (МЕ/мл) или количество копий ДНК/мл, то есть количество ДНК-фрагментов на 1 мл крови. Соотношение между двумя единицами зависит от выбранной тест системы и колеблется от 2 до 7 копий/мл в 1 МЕ/мл. Если система неизвестна, то для пересчета используется усредненное значение:

1 МЕ/мл = 5 копий/мл

Если сразу делается количественный анализ, то граничная норма для диагностирования заболевания составляет 75 МЕ/мл. При результате выше этого показателя, ставится диагноз ВГВ, ниже — ВГВ не выявлен.

Трактовка количественного ПЦР

При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:

• < 10^3 — нагрузка очень низкая, вирус ведет себя неактивно;
• от 10^4 до 10^5 — нагрузка низкая, вирус обычно неактивен;
• 10^6 — нагрузка умеренная, вирус ведет себя активно;
• 10^7 — виремия большая, вирус высокоактивен.

Зная количественно, как ведет себя вирус в организме, можно определить форму заболевания (хроническая, острая или носительство), необходимость проведения дополнительных исследований, реакцию организма и вируса на лечение:

1. Хронический гепатит В диагностируется, если значение трансаминазы будет выше нормы, активность вируса — больше 4, а концентрация ДНК-копий в миллилитре крови составит 10^5 копий.
2. Носительство определяется по следующей картине, которую дают результаты — концентрация < 10^5 копий/мл, а уровень трансаминазы равен стандартному значению.
3. Резистентность (устойчивость) при HBV постоянно контролируется во время лечения. Анализы сдаются каждые 3 месяца. Если в один из моментов виремия при гепатите увеличится в 10 раз, то это означает, что ВГВ приспособился к используемым лекарственным препаратам — стал устойчивым.
4. Благоприятный ход лечения покажет снижение виремии на 85% через 3 дня после начала терапии.
5. Направление на биопсию печени больной получает лишь тогда, когда показатель АЛТ (аланинаминотрансферазы) превышает нормальное значение не более 2 раз за 6 месяцев, а расшифровка ПЦР на гепатит В показывает виремию > 10^5 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.

Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:

• ДНК ВГВ < 2 х 10^4 копий/мл означает, что острая стадия не перейдет в хроническую форму;
• ДНК ВГВ лежит в пределах от 2 х 10^4 до 2 х 10^6 копий/мл означает, что у каждого 4-ого больного ВГВ станет хроническим, то есть хронизация составляет 25-30%;
• ДНК ВГВ > 2 х 10^6 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.

Анализ ПЦР на РНК: количественный и качественный. Расшифровка результатов

Вирусная нагрузка или количественный анализ ПЦР – анализ на определение уровня содержания инфекции в плазме. По сути, количественный анализ – это число молекул инфекционной рибонуклеиновой кислоты в одном миллилитре крови.

Р-ДНК – быстрый, дешевый и не самый точный количественный способ определения вируса на основе выявления клеток разветвленной ДНК. Этот тест может не идентифицировать заражение, присутствующее в организме из-за плохой чувствительности – около 450 МЕ/мл.

Количественный метод транскрипционной амплификации позволяет найти в организме клетки РНК. Этот способ появился сравнительно недавно, он стоит недорого и является достаточно эффективным средством диагностики. Чувствительность теста около 10 МЕ/мл.

Попробуем объяснить результаты анализов. Ниже приведена таблица и расшифровка.

Норма для каждого случая

Обнаруженная концентрация молекул инфекции, МЕ/мл	Описание
отсутствует	Результат – норма. Инфекция не присутствует в организме или присутствует в настолько малом количестве, что находится ниже порога чувствительности теста
0-1,8х10^2	Норма. Количество молекул инфекции меньше допустимых границ
1,8х10² – 8х10^5	Не норма. Инфекция присутствует в небольшом количестве.
8х10^5 – 2,4*10^7	Не норма. Инфекция в большом количестве
Свыше  2,4*10^7	Не норма. Большая опасность. Инфекция сильно выражена

Результат анализа может быть предоставлен исходя и другой классификации – по концентрации копий молекул вируса в единице жидкости. Усредненно можно полагать, что в одной единице МЕ 4 копии на один миллилитр.

Таблица с расшифровкой показателей вирусной нагрузки при гепатите В

Существуют общепринятые показатели вирусной нагрузки.

Единицей измерения является концентрация РНК в 1 мл крови. Возможные результаты анализа и их расшифровка представлены в следующей таблице. Степень нагрузки показывает активность вируса.

Степень нагрузки	Числовой показатель
Низкая. Вирус неактивен	меньше 10*3
Умеренная	10*4 –10*5
Большая	10*6
Максимально высокая	10*7

По результатам тестирования врач определяет методику лечения. При этом учитываются стадия болезни, индивидуальные особенности организма пациента, его возраст и сопутствующие заболевания. При назначении лекарственных препаратов врач консультирует пациента на наличие противопоказаний.

Если при повторном проведении теста через месяц не наблюдается положительная динамика, связанная с уменьшением количественного показателя, то следует говорить об устойчивости вируса к принимаемым препаратам. В этом случае необходима корректировка лечения и назначение препаратов, подавляющих вирусную активность.

Расшифровка показателей вирусной нагрузки при гепатите В требует квалифицированной оценки со стороны врача. При этом учитывается метод проведения тестирования, на основании которого делаются выводы и ставится диагноз.

Кому проводят анализ

Анализ на РНК вируса гепатита С показан людям, которые более подвержены заражению. В такую группу входят:

• наркоманы;
• люди, ведущие беспорядочную половую жизнь;
• все, кто практикует незащищенные половые акты, особенно с новым партнером;
• поклонники тату, пирсинга, салонов красоты (парикмахерских);
• лица, которые подверглись хирургическим вмешательствам (включая роды, стоматологические патологии);
• матери детей, рожденных до 1990 года (дело в том, что в то время болезнь еще не была выявлена, поэтому при переливании крови таких женщин заражали инфекцией);
• дети больных матерей;
• родственники и половые партнеры инфицированного;
• пациенты с хроническими заболеваниями печени невыясненной природы.

Список довольно обширный, поэтому мало кто может с уверенностью сказать, что его риск заражения равен нулю.

Как известно, вирусы состоят из молекул ДНК или РНК. Нуклеиновые кислоты составляют генетический материал. Вирусная нагрузка – это анализ, который проводится, чтобы определить количество РНК возбудителя в крови. Данное исследование можно выполнять при различных патологических состояниях. Среди них – ВИЧ, гепатиты В и С, герпетическая, цитомегаловирусная инфекция и т. д.

Благодаря этому анализу определяется не только количество генетического материала в крови, но и стадия заболевания. То есть вирусная нагрузка является мерой тяжести патологии. Расчет проводится путём вычисления копий РНК в 1 мл плазмы крови. Определить вирусную нагрузку можно только в специальных лабораториях.

Существует несколько методик выполнения данного исследования. Наиболее распространённым считается полимеразная цепная реакция (ПЦР). Благодаря анализу удаётся выявить, насколько быстро прогрессирует патологический процесс. С помощью него подбирается дозировка лекарственных средств, а также определяется прогноз заболевания.

Исследование на вирусную нагрузку выполняют при обнаружении антител к вирусу гепатита С или ВИЧ. Кроме того, анализ выполняется всем больным, находящимся на диспансерном учете с данными патологиями. Сроки проведения вирусной нагрузки зависят от состояния пациента. Анализ выполняют 1 раз в год при стабилизации самочувствия.

Достоинства и недостатки метода ПЦР

В чем преимущества метода полимеразной цепной реакции перед другими диагностическими способами?

1. Широкий спектр применения. С помощью ПЦР, используя типовое оборудование, можно определить любой вирус.
2. Точность определения возбудителя. Применяя различные комбинации ферментов и технику проведения анализа, достигается 100% спецификация исследования для обозначенной инфекции.
3. Высокая чувствительность. Методика позволяет выявить присутствие в крови одной молекулы вируса.
4. Оперативность. Качественный анализ бывает готов через несколько часов, количественный – через двое суток.
5. Диагностика вируса в инкубационном периоде. При ПЦР возбудитель определяется не по наличию антител, когда уже имеется иммунная реакция организма, а до начала патологического процесса, что облегчает лечение.

Недостатки ПЦР являются следствием ее достоинств:

• для чистоты анализа требуется высочайшая степень чистоты, в том числе воздуха в лаборатории, чтобы «чужие» ДНК не попали в исследуемый образец;
• высокие требования к персоналу, осуществляющему забор и анализ биоматериала.

Важно! Оценку полученным результатам должен делать лечащий врач, умеющий отделить подлинный анализ от ложноположительного (когда лечение уже закончено, но в крови остается нежизнеспособный вирус) и ложноотрицательного (когда при клинической картине вирус не обнаружен).

Это может вам пригодиться: Как и через сколько проявляется гепатит С?Читать дальше Какой генотип гепатита С самый опасный и чем он опасен?Читать дальше Какие бывают генотипы гепатита С?Читать дальше Как проявляется генотип гепатита С 1b и возможно ли лечение?Читать дальше

Лечение гепатита С

Правильное и эффективное лечение гепатита С может назначить только врач

При диагностировании гепатита назначается схема противовирусной терапии, которая направлена на уничтожение возбудителя, торможение развития диффузных изменений в органе и улучшение структуры печеночной ткани.

• В лечении гепатита применяют препараты цитокинов, интерферона одновременно с иммунодепрессантами. Все противовирусные препараты должен назначать только врач. Не рекомендуется принимать лекарства от гепатита при употреблении алкоголя, циррозе печени, беременности, аутоиммунных заболеваниях, сахарном диабете, патологиях сердечно-сосудистой системы.
• Комбинированная терапия Пегинтерфероном и Рибавирином значительно повышает шансы на избавление от вируса. Применяют Пегинтерфероны раз в неделю, а Рибавирин 2 раза в день. Длительность лечения зависит от генотипа вируса, который выявляется у пациентов. При обнаружении генотипа 1 лечение продолжается в течение года, а при 2 и 3 генотипе – около полугода.
• При непереносимости Рибовирина или противопоказаниях к его применению используют Ремантадин, Ламивудин. Препараты интерферона могут применяться в качестве инъекций (Роферон, Интераль, Интрон-А и др.), в виде свечей (Виферон) или в пролонгированной форме (Пегинтрон, Пегасис). Ректальные свечи Виферон используются в том случае, когда инъекцию нет возможности выполнить.
• Из иммуномодуляторов назначают Имунофан, Гепон, Глутоксим, Беталейкин и др.
• Противовирусным действием обладают также гепатопротекторы: Фосфоглив, Силимар, Эссенциале и др. Они поддерживают и улучшают функции печени.

При проведении противовирусной терапии больной должен постоянно сдавать анализ крови. На основании полученных результатов делается прогноз об эффективности лечения.

Если по окончании приема противовирусных препаратов спустя полгода в крови отсутствует вирус, то это указывает на благоприятный исход и полное излечение. У многих пациентов на протяжении нескольких лет может не наблюдаться вирус в крови, к тому же будут отсутствовать симптомы заболевания.

Что делать дальше, как избавиться от вируса?

Главное не паниковать, сейчас гепатит лечится не сложней гриппа. Для назначения терапии современными препаратами необходимы следующие данные:

1. Вирусная нагрузка (Количественный анализ методом ПЦР)
2. Генотип вируса (Анализ на генотипирование)
3. Уровень фиброза (Фибросканирование, эластография)

Когда у вас на руках есть результаты всех этих анализов, вы можете по таблице определиться со схемой лечения. Мы рекомендуем обратиться к лечащему врачу и проконсультироваться на предмет назначения терапии современными противовирусными препаратами прямого действия. Многие врачи до сих пор назначают малоэффективную терапию интерферонами + рибавирином, имейте ввиду, и настаивайте на терапии новыми лекарствами.

Сколько стоит терапия новыми препаратами?

В среднем от 29 700 до 54 000 рублей, в зависимости от схемы лечения. У нас на сайте полный курс лечения индийскими препаратами на 12 недель стоит 33 000 рублей, препаратами из Шри-Ланки — 29 700 рублей.

Спасибо за то, что дочитали до статью конца. Если остались вопросы, дежурный врач-инфекционист всегда готов ответить на них (чат в правом нижнем углу экрана).

Определение иммунного статуса при ВИЧ

Вирусная нагрузка при ВИЧ помогает исследовать иммунный статус пациента. У больных этот показатель снижен. Благодаря определению иммунного статуса можно судить о состоянии защитных сил организма. Данный показатель включает в себя совокупность количественных и качественных характеристик. Чтобы определить иммунный статус человека, проводится несколько последовательных этапов. Среди них:

1. Сбор жалоб и анамнеза. Выясняется частота заболеваемости инфекционными патологиями (ОРВИ, герпес, грибковые поражения), реакция на прививки, лекарственные вещества.
2. Определение в крови количества иммунных клеток. К ним относятся лейкоциты, лимфоциты, моноциты и гранулоциты.
3. Выполнение специальных лабораторных тестов. Среди них – анализ на вирусную нагрузку.

Далее проводится иммунологический этап. Он включает определение содержания Т- и В-лимфоцитов, иммуноглобулинов, рецепторов иммунных клеток. При ВИЧ особое значение придаётся концентрации в крови CD4. Это рецепторы защитных клеток – Т-хелперов. Именно они поражаются вирусом иммунодефицита. После проведения всех этапов выполняется анализ информации. Таким образом, врач делает заключение об иммунном статусе.

Возможны ли ошибки в заключении по анализу?

При резких колебаниях значений врач расшифровывает анализ и не исключает возможность ошибки. Она связана:

• с неправильным хранением материала для исследования (крови) после забора на анализ;
• наличием в крови пациента химических соединений лекарств, Гепарина, жидкостей с высоким содержанием белков;
• ошибкой медицинского работника (лаборанта).

Обычно врачи стараются направлять на анализы в одну и ту же лабораторию. Повторное исследование позволяет более внимательно проверить результат.